操作規(guī)范:
一.儀器描述
樣品槽可放置0.2mlPCR管(12×8),0.5mlPCR管(11×7)及96孔板。將樣品放入樣品槽后,將熱蓋上的旋鈕按順時針方向旋至對應(yīng)的管型處使其緊閉。
二.開機(jī)
打開機(jī)器后部的主開關(guān)。
三.設(shè)計程序
1、常規(guī)PCR反應(yīng):
出現(xiàn)主菜單后,按standard或new方式編制要運(yùn)行的PCR程序,在輸入預(yù)變性的溫度及時間、變性的溫度及時間、退火的溫度及時間、延伸的溫度及時間、Sock的溫度后,按start/stop鍵開始啟動運(yùn)行當(dāng)前程序。
如果設(shè)計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令,則程序啟動后需要輸入反應(yīng)管的相應(yīng)型號和樣品體積。
——用SEL鍵選擇反應(yīng)管的型號,用ENTER鍵確認(rèn)。
——輸入溶液體積,用Enter 鍵確認(rèn)。
——當(dāng)程序運(yùn)行時,按Opt鍵可以顯示大概的運(yùn)行時間和預(yù)期結(jié)束的時間。
2、梯度PCR反應(yīng):
開機(jī)后按照常規(guī)PCR反應(yīng)設(shè)置程序,按控制面板上的四個方向選擇鍵將閃爍的光標(biāo)移至程序退火這一步的數(shù)字序號處(一般為3),按住控制面板上的OPTIONS鍵,則進(jìn)入溫度梯度程序設(shè)計。
按方向選擇鍵將光標(biāo)移至G = 0.0°(輸入數(shù)值范圍0-12),一旦輸入這個數(shù)值,即對樣品槽的每一列設(shè)定了不同的溫度,預(yù)設(shè)的溫度在樣品槽的中間,沿著樣品槽從做至右溫度依次升高。用0.2ml的管可設(shè)置12個不同的溫度,用0.5ml的管則可設(shè)置11個不同的溫度。在Option/Gradient中查看溫度分布。反應(yīng)槽最高溫度不能超過99℃。
3、其它參數(shù)設(shè)置及說明:
——T 輸入溫度、循環(huán)次數(shù)、以及相關(guān)選項。
——±0.0°溫度變異量(±0.0°):每一個循環(huán)溫度增加或減少的量。必須注意溫度不能超過99℃。例如,變異量是+0.1℃,25個循環(huán),則起始溫度不能超過96.5℃。先輸入數(shù)值,然后輸入加減號。+:溫度上升;-:溫度下降。
——±0.00 時間變異量(±S):輸入每個循環(huán)時間的增加或減少(最大為1分鐘)
——R=3.0 °/S Ramp(K/S)代表了一個循環(huán)曲線的升降溫速率。這個值越高,則加熱或降溫就越快。允許值范圍:0.3-3.0K/S。
——±0.0 °/S Ramp increment(±S):輸入升降溫速率的變異量。該速率不能超過3K/S,因此,如果起始速率為0.3,變異量為0.1,則最大循環(huán)次數(shù)為27個。
四.程序運(yùn)行
程序設(shè)計好后可直接按控制面板上的start鍵運(yùn)行,
如果設(shè)計程序時選擇了CNTRL/TUBE命令,則程序啟動后需要輸入反應(yīng)管的相應(yīng)型號和樣品體積。
——用SEL鍵選擇反應(yīng)管的型號,用ENTER鍵確認(rèn)。
——輸入溶液體積,用Enter 鍵確認(rèn)。
——當(dāng)程序運(yùn)行時,按Opt鍵可以顯示大概的運(yùn)行時間和預(yù)期結(jié)束的時間。
——Lid用來確定熱蓋的溫度。允許值為0-110℃。
啟動時,NOWAIT 無需熱蓋溫度,程序直接啟動。
WAIT 程序直到熱蓋達(dá)到預(yù)設(shè)的溫度才啟動。
五. 關(guān)機(jī)
程序運(yùn)行結(jié)束后,按Exit退出原程序。關(guān)閉機(jī)器后部的開關(guān)。
注意:
1. Sock時,溫度應(yīng)設(shè)為10℃,時間不要超過30分鐘。溫度過高,時間過長,易導(dǎo)致儀器的損壞。
2. 操作時,要嚴(yán)格遵守以上原則,及時記錄儀器運(yùn)行的情況。
保養(yǎng):
1.樣品池的清洗
先打開蓋子,然后用95%乙醇或10%清洗液浸泡樣品池5min,然后清洗被污染的孔;用微量移液器吸取液體,用棉簽吸干剩余液體;打開PCR儀,設(shè)定保持溫度為50℃的PCR程序并使之運(yùn)行,讓殘余液體揮發(fā)去除。一般5~10min即可。
2.熱蓋的清洗
對于熒光定量PCR儀,當(dāng)有熒光污染出現(xiàn),而且這一污染并非來自樣品池時;或當(dāng)有污染或殘跡物影響到熱蓋的松緊時,需要用壓縮空氣或純水清洗墊蓋底面,確保樣品池的孔鏡干凈,無污物阻擋光路。
3.儀器外表面的清洗
清洗儀器的外表面可以除去灰塵和油脂,但達(dá)不到消毒的效果。選擇沒有腐蝕性的清洗劑對PCR儀的外表面進(jìn)行清洗。
4.更換保險絲
先將PCR儀關(guān)機(jī),拔去插頭,打開電源插口旁邊的保險盒,換上備用的保險絲,觀察是否恢復(fù)正常
維修:
。1)PCR儀器需要定期檢測,視制冷方式而定一般半年至少一次。
2)PCR反應(yīng)的要求溫度與實際分布的反應(yīng)溫度是不一致的,當(dāng)檢測發(fā)現(xiàn)各孔平均溫度差偏離設(shè)置溫度大于1~2℃時,可以運(yùn)用溫度修正法糾正PCR實際反應(yīng)溫度差。
3)PCR反應(yīng)過程的關(guān)鍵是升、降溫過程的時間控制,要求越短越好,當(dāng)PCR儀的降溫過程超過60s,就應(yīng)該檢查儀器的制冷系統(tǒng),對風(fēng)冷制冷的PCR儀要較徹底地清理反應(yīng)底座的灰塵;對其他制冷系統(tǒng)應(yīng)檢查相關(guān)的制冷部件。
4)一般情況如能采用溫度修正法糾正儀器的溫度時,不要輕易打開或調(diào)整儀器的電子控制部件,必要時要請專業(yè)人員修理或利用儀器電子線路詳細(xì)圖紙進(jìn)行維修。